HLA-Ⅱ类基因与狼疮性器官的系统损害的相关性研究

摘　要　目的　分析HLA-Ⅱ类基因与狼疮性器官、系统损害的相关性，探讨系统性红斑狼疮(SLE)从基因到临床表达的发病机制。方法　应用PCR-SSOPH技术检测113例确诊SLE病人的DR、DQA1、DQB1等位基因。结果　浆膜炎与DQB1*0601正相关；神经精神症状与DRB1*1501正相关；血肌酐增高与DQB1*0302、DQB1*0401正相关；血尿素氮增高与DQB1*0201负相关；蛋白尿与DQB1*0301、DRB3*0202、DRB3*0301、DRB1*1101负相关；血尿与DQB1*0301、DRB3*?0301负相关；管型尿与DRB1*0302正相关；贫血和白细胞减少分别与DQB1?0201正相关；血小板减少与DRB1*1502和DRB1*1202正相关；淋巴细胞减少与DRB1*0302正相关；C3降低与DQB1*0303正相关，与DQB1*0301负相关；狼疮细胞阳性与DRB1*1501负相关。结论　多个HLA-Ⅱ类等位基因和SLE的临床表达有相关性，国人的SLE遗传背景与其他人种有所不同。
　　

　　关键词：红斑狼疮，系统性；HLA抗原；多态现象(遗传学)；易感性与特异性；等位基因

　　系统性红斑狼疮(SLE)发病与多种HLA等位基因相关。为深入探讨这些基因或其关联的亚型与SLE临床表达关系，我们引入PCR-SSOPH检测技术，对113例确诊的SLE病人进行HLA-DR、DQ位点等位基因分型，分析基因与狼疮性器官、系统损害的相关性，找出重型SLE相关基因。
1　资料与方法
1.1　病例选择：入选的113例患者均符合1982年美国风湿病协会(ARA)SLE诊断标准4条或4条以上［1］。记录患者的性别、发病年龄，以及有无以下SLE临床表现：蝶型红斑、盘状损害、光敏、口腔溃疡、关节炎、雷诺现象、狼疮发、神经精神症状、浆膜炎、血细胞减少、狼疮肾炎和C3降低(＜0.8 g/L)等。
　　标本：外周静脉血5 ml(抗凝)。
1.2　实验方法：①基因组DNA的提取：盐析法。②DNA体外扩增—聚合酶链反应(PCR)。共有6对引物，其中AMP-B为DR位点扩增的公用引物。③地高辛(DIG)—ddUTP3′末端标记寡核苷酸探针杂交。
1.3　分型标准：以显著影响生存率的恶性指标作为重型SLE分型标准［2］。
1.4　统计学处理：χ2相关分析、多因素回归分析和多项比较校正，以P＜0.05为具统计学显著性。
2　结　　　果
2.1　HLA-Ⅱ类基因分型
2.1.1　等位基因分型结果：用12个DQA1探针检出7个亚型，未检出DQA1*0401；用15个DQB1探针检出12个等位基因，未检出DQB1*0504、*0603和*0604；用4个DR2探针检出4个亚型：用4个DR52组探针检出3个亚型，未检出DRB3*0201；用8个DR52相关组探针分出8个亚型。
2.1.2　H-W吻合度检测结果：在HLA-DQA1和DQB1座位上，基因型的期望值与观察值很好吻合，分别P＞0.1和P＞0.5，说明基因已达到遗传平衡，本组病人可作为可靠的供研究的群体资料。
2.2　HLA-Ⅱ类等位基因与SLE器官、系统损害的相关性(见表1)
2.2.1　HLA-DQA1位点等位基因：DQA1*0101与淋巴细胞减少正相关；DQA1*0102与狼疮细胞阳性负相关；DQA1*0501与蛋白尿负相关，Pc(多项比较校正P值)＞0.05。
2.2.2　HLA-DQB1位点等位基因：HLA-DQB1*0201与贫血和白细胞减少正相关，与血尿素氮增高负相关；DQB1*0302与血肌酐增高正相关；DQB1*0303与C3降低正相关；DQB1*0401与血肌酐增高正相关；DQB1*0602与发病年龄正相关，均分别P＜0.05，Pc＞0.05。
　　DQB1*0301分别与蛋白尿和血尿负相关，分别P＜0.001和0.01，分别Pc＜0.05和Pc＞0.05；与C3降低负相关，分别P＜0.05和Pc＞0.05。DQB1*0601与浆膜炎正相关，分别P＜0.01，Pc＜0.05。
2.2.3　HLA-DR2组等位基因：DRB1*1501与神经精神症状正相关，与狼疮细胞阳性负相关；DRB1*1502与血小板减少正相关，均分别P＜0.05，Pc＞0.05。
2.2.4　HLA-DR52组等位基因：DRB3*0202与蛋白尿负相关；DRB3?0301与蛋白尿和血尿均呈负相关，均分别P＜0.05，Pc＞0.05。
2.2.5　HLA-DR52相关组等位基因：DRB1?0302与淋巴细胞减少和管型尿正相关；DRB1*1101与蛋白尿负相关；DRB1*1202与血小板减少正相关，均P＜0.05，Pc＞0.05。

表1　HLA-DR和DQ等位基因与SLE临床指标的相关性

等位基因 临床指标 N1/N2 N3/N4 χ2值 P值 Pc值
DQA1*0101 淋巴细胞减少 10/64 16/49 　4.45 0.03＋ ＞0.05
DQA1*0102 狼疮细胞阳性 15/25 　2/11 　8.04 0.013－ ＞0.05
DQA1*0501 蛋白尿 19/69 　5/44 　4.20 0.04－ ＞0.05
DQB1*0201 贫血 　　5/51 18/62 　6.38 0.01＋ ＞0.05
　 白细胞减少 　　8/65 15/48 　6.11 0.01＋ ＞0.05
　 尿素氮增高 16/51 　1/11 　7.00 0.03－ ＞0.05
DQB1*0301 蛋白尿 27/69 　3/44 14.39 0.000 1－ ＜0.01
　 血尿 29/90 　1/23 　7.30 0.007－ ＞0.05
　 C3降低 20/51 　9/55 　7.66 0.02－ ＞0.05
DQB1*0302 血肌酐增高 　7/55 4/7 　8.84 0.01＋ ＞0.05
DQB1*0303 C3降低 10/51 17/55 　8.50 0.01＋ ＞0.05

DQB1*0401 血肌酐增高 　1/55 2/7 　8.81 0.01＋ ＞0.05
DQB1*0601 浆膜炎 21/99 　8/14 　8.30 0.03＋ ＜0.05
DRB1*1501 CNS损害 19/99 　5/13 　6.03 0.049＋ ＞0.05
　 狼疮细胞阳性 11/25 　0/11 10.96 0.01－ ＞0.05
DRB1*1502 血小板减少 　0/55 　6/58 　6.01 0.01＋ ＞0.05
DRB3*0202 蛋白尿 19/69 　3/44 　7.36 0.007－ ＞0.05
DRB3*0301 蛋白尿 12/69 　2/44 　4.08 0.04－ ＞0.05
　 血尿 14/90 　0/23 　4.08 0.04－ ＞0.05
DRB1*0302 淋巴细胞减少 　1/64 　5/49 　4.12 0.04＋ ＞0.05
　 管型尿 　4/104 2/9 　5.56 0.02＋ ＞0.05
DRB1*1101 蛋白尿 11/69 　1/44 　5.29 0.02－ ＞0.05
DRB1*1202 血小板减少 　0/55 　5/58 　4.96 0.03＋ ＞0.05

注：N1：等位基因阳性＋临床指标阴性数，N2：临床指标阴性数，N3：等位基因阳性＋临床指标阳性数，N4：临床指标阳性数，－：负相关，＋：正相关
　　此外，本研究尚发现HLA-Ⅱ类基因与多种自身抗体显著关联，但与性别、蝶型红斑、盘状损害、光敏、口腔溃疡、关节炎、雷诺现象和狼疮发无显著相关。
2.2.6　多因素回归分析：结果表明等位基因相互间存在复杂的交互关系，DQB1*0401和DQB1*0605

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