云南省4种伊蚊的乙型脑炎病毒分离物的研究

张海林 施华芳 米竹青 自登云 龚正达
侯宗柳 李兆祥 张云智 张嘉玉 杨兰萍

摘 要 在云南省西南边境9县市捕获伊蚊属雌性成蚊16种19367只，用细胞法和乳鼠法分离病毒。从185批6491只白纹伊蚊中分离到病毒2株，从50批1605只剌扰伊蚊中分离到病毒2株，从23批772只窄翅伊蚊中分离到病毒2株，从4批103只阿萨姆伊蚊中分离到病毒1株。其它12种共10396只伊蚊的病毒分离物为阴性。分离到的7株病毒经免疫荧光、酶免疫、血凝抑制和中和试验鉴定，均为乙型脑炎病毒(JE virus)。白纹伊蚊是野外竹林的优势蚊种。分析认为白纹伊蚊在当地乙型脑炎病毒保存和传播中起重要作用，刺扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊亦可参与该病毒的传播。
Isolation of Japanese Encephalitis Virus from Four Species of
Aedes Mosquito in Yunnan Province

Zhang Hailin Shi Huafang Mi Zhuqing Zi Dengyun Gong Zhengda
(Yunnan Provincial Institute of Epidemic Diseases Control and Research, Dali, Yunnan 671000)

Abstract A total of 19 367 adult female mosquitoes belonging to 16 species of Aedes genus were captured from nine countries, south-western part of Yunnan Province, China, and were examined by C6/36 cell method and suckling mouse method. Two strains of Japanese encephalitis (JE) virus were isolated from 6491 (185 pools) Aedes albopictus， two strains of JE virus were isolated from 1605 (50 pools) Ae. vexans,two strains of JE virus were isolated from 772 (23 pools) Ae. lineatopennis, and a strain of JE virus was isolated from 103 (4 pools) Ae. assamensis. Isolation of JE virus was negative to other 12 species of Aedes mosquitoes. Ae. albopictus was the superior species of mosquitoes in bamboo forest. These results indicated that Ae. albopictus from Yunnan has a potential role in the maintenance and transmission of JE virus in nature. Ae. vexans, Ae. lineatopennis and Ae. assamensis are also considered to be transmitting vector of JE virus in Yunnan.
Key words Mosquito, Aedes, Japanese encephalitis virus, Vector, Yunnan province

国内外在流行性乙型脑炎(简称乙脑)媒介研究中做了大量工作，明确了三带喙库蚊(Culex tritaeniorhynchus)是本病主要传播媒介，一些库蚊属蚊虫在乙脑病毒传播中亦起重要作用。然而，伊蚊在本病传播中的作用研究较少。为了解伊蚊属蚊虫自然感染乙脑病毒情况及媒介意义，我们在云南省西南部热带地区采集蚊虫进行病毒分离，现将结果报告如下。

1 材料与方法

1.1 蚊虫采集 在云南省景洪、勐腊、勐海、河口、孟连、耿马、盈江、潞西和瑞丽9县市的野外竹林和畜圈捕蚊，将蚊虫置低温冻死后分类编号，20～50只一批，放入小瓶内，液氮冻存待检。
1.2 病毒分离 蚊虫经常规处理后，制成接种液，接种于C6/36细胞和乳鼠分离病毒。细胞出现规律病变或乳鼠发病即行鉴定。
1.3 病毒鉴定
1.3.1 抗体 乙脑病毒家兔免疫血清为本室自制；乙脑病毒单克隆抗体是中国预防医学科学院病毒学研究所和中国药品生物制品检定所的制品；兔抗鼠荧光抗体和羊抗兔荧光抗体是北京生物制品研究所和兰州生物制品研究所的制品；酶标SpA是中国预防医学科学院流行病学微生物学研究所的制品。
1.3.2 抗原 乙脑病毒抗原为鼠脑蔗糖丙酮法抗原，本室制备。
1.3.3 免疫荧光试验(IFAT) 采用间接法。感染细胞培养至第5天，将细胞吹下，滴于玻片，常规染色制片，用OLYMPUS荧光显微镜检查。
1.3.4 细胞酶免疫(C-EIA)试验 感染细胞培养于聚苯乙烯塑料板，至第5天，常规固定，加各种结合物及样品，用目测法判定结果。方法详见文献[1]。
1.3.5 血凝(HA)及血凝抑制(HI)试验 采用常规微量法。用0.5%鸽血球测定。血清用白陶土和鸽血球常规处理，抗原为4u。以50%的血球凝集被抑制为终点。
1.3.6 中和试验 采用固定血清稀释病毒法。用3～4周龄小白鼠测定，观察14d，按Reed-Muench法计算中和指数。

2 结果

2.1 病毒分离

在上述9县市共采获伊蚊属雌性成蚊16种19367只作病毒分离，从白纹伊蚊、剌扰伊蚊、窄翅伊蚊和阿萨姆伊蚊中分离出病毒7株(表1)。所获毒株均能引起乳小白鼠或3周龄小白鼠发病和死亡，亦能导致C6/36细胞出现病变，并具有滤过性。

表1 从云南省4种伊蚊中分离乙脑病毒
Table 1 Isolation of Japanese encephalitis virus from four species of Aedes mosquitoes collected in Yunnan province

蚊种
Species of mosq. 采集地点
Collecting site 蚊虫只数
No.of mosq. 批数
Pools of mosq. 阳性批数
No.of positive pools 病毒号及阳性蚊采集县
Virus code and collecting counties of positive m

osq.
白纹伊蚊
Aedes albopictus 竹林Bamboo forest 6491 185 2 B88-81景洪Jinghong
D266瑞丽Ruili
剌扰伊蚊
Aedes vexans 竹林Bamboo forest
畜圈Stable 1194
411 38
12 2
0 B24-5景洪Jinghong
B86-17景洪Jinghong
窄翅伊蚊
Aedes lineatopennis 竹林Bamboo forest
畜圈Stable 76
696 3
20 1
1 D107盈江Yingjiang
B88-17景洪Jinghong
阿萨姆伊蚊
Aedes assamensis 竹林Bamboo forest 103 4 1 L99耿马Gengma

《云南省4种伊蚊的乙型脑炎病毒分离物的研究》