乳腺癌患者淋巴细胞功能相关抗原表达水平的临床研究
内容提要 目的：探讨乳腺癌患者血、癌组织、引流淋巴结中淋巴细胞功能相关抗原CD11a、CD18、CD54蛋白表达水平及化疗和中药益气养血冲剂对其表达水平的影响。方法：免疫组化法和流式细胞术检测乳腺癌患者血、癌组织、引流淋巴结中CD11a、CD18、CD54蛋白表达水平在化疗前、后和化疗加服益气养血冲剂后的改变。结果：乳腺癌患者血中CD54水平与良性对照组比较明显增高，癌组织淋巴细胞CD11a、CD18、CD54水平明显增高，乳腺癌细胞CD54表达阳性率100%，阴性淋巴结CD11a、CD18、CD54表达水平明显高于阳性淋巴结。结论：乳腺癌患者粘附分子水平明显异常，免疫粘附功能障碍，化疗在杀伤癌细胞的同时，对机体免疫功能产生不良影响，益气养血冲剂能够改善化疗后乳腺癌患者淋巴细胞粘附功能等细胞免疫功能。
淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte functionassociated antigen-1, LFA-1)是一种膜蛋白分子，是由α(CD11a，180KD)和β(CD18，95KD)两条多肽链组成的异二聚体(1)。CD54亦称细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)为单链糖蛋白，是LFA-1的配基。它们共同构成整合蛋白的重要组成部分，与肿瘤免疫密切相关，但其在乳腺癌发生、发展中发挥了怎样的作用，药物治疗对其有何影响，目前尚不清楚，本研究就这些问题进行了初步探讨。
资料和方法
1 临床资料 本研究选择天津医科大学附属肿瘤医院乳腺科收治的72例乳腺疾病患者，皆为女性，均经切除及病理检查证实。在全部病例中有乳腺癌64例，年龄36～68岁，中位年龄47岁；病理类型均为浸润性非特殊型癌，且伴腋淋巴结转移，其中单纯手术组18例，年龄38～68岁，中位年龄49岁；术前无化疗和中药治疗；化疗组16例，年龄38～65岁，中位年龄45岁；先CMF方案化疗4周后再手术；化疗加服中药组30例，年龄36～68岁，中位年龄46岁；先化疗同时服中药4周后再手术；良性对照组8例，年龄37～58岁，中位年龄44岁；单纯行乳腺局部切除术。
2 治疗方法 化疗治疗方案：采用CMF方案，环磷酰胺(CTX)600mg，氟脲嘧啶(5-FU)500mg，氨甲碟呤(MTX)20mg，3药联合，每周1次，加在5%葡萄糖注射液中静脉滴注，共4周。中药治疗方案：益气养血方剂组成：黄芪30g 党参20g 当归20g 女贞子20g 丹参20g 山茱萸15g 仙灵脾15g，制成颗粒冲剂，每日3次，每次1袋，每袋9g，连续服药4周。
3 测定项目和检测方法
3.1 标本采集 手术当日清晨采集患者全血5ml，分离淋巴细胞，置4%甲醛中备用；同时术中取患者癌组织和引流淋巴结，癌组织立即置液氮中备用；引流淋巴结立即分离淋巴细胞，置4%甲醛中备用。在对各组引流淋巴结的检测研究时，根据病理腋淋巴结转移与否，将单纯手术组的同一患者引流淋巴结分为有转移淋巴结(阳性)和无转移淋巴结(阴性)两组分别进行研究，以便对比。而对于化疗组和化疗加中药组则只选择有转移淋巴结进行研究。
3.2 血和引流淋巴结淋巴细胞CD11a、CD18、CD54流式细胞术(FCM)检测 抗体购自法国国际免疫试剂公司(IMMUNOTECH)。首先分离血、引流淋巴结淋巴细胞，然后采用免疫荧光直接标记法制备抗原。FCM检测方法：使用美国BD公司生产的FACS 420型流式细胞仪，测量数据输入HP-300Consort30计算机，并用免疫系统软件程序进行资料处理，检测速度为每秒钟1000个细胞，以鸡红细胞作为标准样品，调整仪器CV值为5.0%以内。
3.3 癌组织淋巴细胞CD11a、CD18、CD54免疫组化检测 冰冻标本切4μm厚片，ABC法染色，CD11a、CD54单抗购自ZYMED公司，CD18单抗购自军事医学科学院，Ⅱ抗和ABC复合物购自Vector公司。观察方法：(1)在装有目镜网格测微尺(80×80μm)的400倍视野下计数每例切片淋巴细胞的阳性细胞密度(细胞数/0.05mm2)。(2)在装有目镜网格测微尺(同上)的400倍视野下随机计数8个网格内的阳性细胞和阴性细胞数，按阳性细胞数/总细胞数×100%计算出每例切片中阳性细胞百分比，并将其分为4个等级：－：无阳性细胞；＋：阳性细胞＜30%；＋＋：阳性细胞30%～60%；＋＋＋：阳性细胞＞60%。
4 统计学处理 应用SAS统计软件进行χ2检验、t检验、方差分析和直线相关分析。
结果
1 各组患者血中CD11a、CD18、CD54检测结果见表1。乳腺癌患者血中CD11a、CD18水平与良性对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；乳腺癌患者血中CD54水平明显高于良性对照组(P＜0.05)；化疗后患者血中CD11a、CD18、CD54水平与单纯手术组比较均明显降低，化疗加中药治疗组患者血中CD11a、CD18、CD54水平均明显高于化疗组(P＜0.05)。
表1 各组患者血淋巴细胞中CD11a、CD18及CD54检测结果 (道数，X±s). 《乳腺癌患者淋巴细胞功能相关抗原表达水平的临床研究》
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淋巴细胞功能相关抗原(lymphocyte functionassociated antigen-1, LFA-1)是一种膜蛋白分子，是由α(CD11a，180KD)和β(CD18，95KD)两条多肽链组成的异二聚体(1)。CD54亦称细胞间粘附分子(intercellular adhesion molecule-1，ICAM-1)为单链糖蛋白，是LFA-1的配基。它们共同构成整合蛋白的重要组成部分，与肿瘤免疫密切相关，但其在乳腺癌发生、发展中发挥了怎样的作用，药物治疗对其有何影响，目前尚不清楚，本研究就这些问题进行了初步探讨。
资料和方法
1 临床资料 本研究选择天津医科大学附属肿瘤医院乳腺科收治的72例乳腺疾病患者，皆为女性，均经切除及病理检查证实。在全部病例中有乳腺癌64例，年龄36～68岁，中位年龄47岁；病理类型均为浸润性非特殊型癌，且伴腋淋巴结转移，其中单纯手术组18例，年龄38～68岁，中位年龄49岁；术前无化疗和中药治疗；化疗组16例，年龄38～65岁，中位年龄45岁；先CMF方案化疗4周后再手术；化疗加服中药组30例，年龄36～68岁，中位年龄46岁；先化疗同时服中药4周后再手术；良性对照组8例，年龄37～58岁，中位年龄44岁；单纯行乳腺局部切除术。
2 治疗方法 化疗治疗方案：采用CMF方案，环磷酰胺(CTX)600mg，氟脲嘧啶(5-FU)500mg，氨甲碟呤(MTX)20mg，3药联合，每周1次，加在5%葡萄糖注射液中静脉滴注，共4周。中药治疗方案：益气养血方剂组成：黄芪30g 党参20g 当归20g 女贞子20g 丹参20g 山茱萸15g 仙灵脾15g，制成颗粒冲剂，每日3次，每次1袋，每袋9g，连续服药4周。
3 测定项目和检测方法
3.1 标本采集 手术当日清晨采集患者全血5ml，分离淋巴细胞，置4%甲醛中备用；同时术中取患者癌组织和引流淋巴结，癌组织立即置液氮中备用；引流淋巴结立即分离淋巴细胞，置4%甲醛中备用。在对各组引流淋巴结的检测研究时，根据病理腋淋巴结转移与否，将单纯手术组的同一患者引流淋巴结分为有转移淋巴结(阳性)和无转移淋巴结(阴性)两组分别进行研究，以便对比。而对于化疗组和化疗加中药组则只选择有转移淋巴结进行研究。
3.2 血和引流淋巴结淋巴细胞CD11a、CD18、CD54流式细胞术(FCM)检测 抗体购自法国国际免疫试剂公司(IMMUNOTECH)。首先分离血、引流淋巴结淋巴细胞，然后采用免疫荧光直接标记法制备抗原。FCM检测方法：使用美国BD公司生产的FACS 420型流式细胞仪，测量数据输入HP-300Consort30计算机，并用免疫系统软件程序进行资料处理，检测速度为每秒钟1000个细胞，以鸡红细胞作为标准样品，调整仪器CV值为5.0%以内。
3.3 癌组织淋巴细胞CD11a、CD18、CD54免疫组化检测 冰冻标本切4μm厚片，ABC法染色，CD11a、CD54单抗购自ZYMED公司，CD18单抗购自军事医学科学院，Ⅱ抗和ABC复合物购自Vector公司。观察方法：(1)在装有目镜网格测微尺(80×80μm)的400倍视野下计数每例切片淋巴细胞的阳性细胞密度(细胞数/0.05mm2)。(2)在装有目镜网格测微尺(同上)的400倍视野下随机计数8个网格内的阳性细胞和阴性细胞数，按阳性细胞数/总细胞数×100%计算出每例切片中阳性细胞百分比，并将其分为4个等级：－：无阳性细胞；＋：阳性细胞＜30%；＋＋：阳性细胞30%～60%；＋＋＋：阳性细胞＞60%。
4 统计学处理 应用SAS统计软件进行χ2检验、t检验、方差分析和直线相关分析。
结果
1 各组患者血中CD11a、CD18、CD54检测结果见表1。乳腺癌患者血中CD11a、CD18水平与良性对照组比较无显著性差异(P＞0.05)；乳腺癌患者血中CD54水平明显高于良性对照组(P＜0.05)；化疗后患者血中CD11a、CD18、CD54水平与单纯手术组比较均明显降低，化疗加中药治疗组患者血中CD11a、CD18、CD54水平均明显高于化疗组(P＜0.05)。
表1 各组患者血淋巴细胞中CD11a、CD18及CD54检测结果 (道数，X±s). 《乳腺癌患者淋巴细胞功能相关抗原表达水平的临床研究》
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